猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

使用说明书

【产品名称】

通用名：猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Classical Swine fever virus (ELISA)

【包装规格】 96T×2/盒

【预期用途】 猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine fever virus，CSFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。

本试剂盒用于检测猪血清、血浆中猪瘟病毒抗体，可用于猪瘟病毒疫苗免疫效果评价。

【原    理】

    本试剂盒系由预包被猪瘟抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪瘟抗体。实验时在酶标板中加入阴阳性对照和待检样本，经温育后若样品中含有猪瘟抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪瘟抗体。

【试剂盒组成】 

【储存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【器材的准备】

1. 含450nm波长的酶标仪

2. 37℃恒温设备

3. 可调微量移液器

4. 移液器配套使用的枪头

5. 离心管

6. 蒸馏水或去离子水

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加250μl洗涤液，静置20秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl。置37℃反应30分钟。

7.扣去孔内液体，每孔加250μl洗涤液，静置20秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

8.每孔依次加显色液100μl，混匀，37℃避光反应30分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm测定各孔吸光值（OD值）。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.20，阳性对照≥0.6，否则实验无效

【检验结果的解释】

1.样品OD值≥0.5为阳性；样品OD值＜0.5为阴性。

2.本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

    该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪瘟抗体，根据OD值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。