TMB，即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm 或 620-650nm 测定吸光度。加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度。本试剂盒常用于 ELISA检测，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。用于 ELISA检测时，每个样品通常使用 0.2毫升显色液。

本显色剂采用**的显色技术，把所有的相关试剂全部配制在单一溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，使检测更加稳定可靠。
使用说明：

1.根据参考ELISA试剂盒的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2. 经HRP标记物孵育并充分洗涤后，酶标板每孔加入 200ul TMB 显色液。

3. 室温避光孵育 3-30 分钟或更长时间(可长达 24 小时)，直至显色至预期深浅。

4. 加入50 微升2M H2SO4 终止反应，随后在 450nm测定吸光度。
常见问题：

1. 背景显色太深。

如果背景(没有样品的对照孔)显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，另一方面可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2. 没有显色或显色太弱。

a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否可以被正常显色。

b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

c. 可以适当延长显色时间。

注意事项：

1）TMB 对人体有刺激性，请注意适当防护。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

*Important Note: Thisproduct assupplied is intended for research use only, not for usein human,therapeutic ordiagnosticapplications.

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