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分子技术检测禽流感
2015-06-29  点击:9

H7N9禽流感具体是如何被检测出来的呢?

可使用分子生物技术对禽H7N9的检测
    科普:H7N9是禽流感的一种亚型。流感病毒颗粒外膜由两型表面糖蛋白覆盖,一型为血细胞凝集素(即H),一型为神经氨酸酶(即N),H又分15个亚型,N9个亚型。所有人类的流感病毒都可以引起禽类流感,但不是所有的禽流感病毒都可以引起人类流感,禽流感病毒中,H3H5H7H9可以传染给人,其中H5为高致病性。H3为人犬共患,依据流感病毒特征可分为HxNx135种亚型,H7N9亚型禽流感病毒是其中的一种。这个病毒的生物学特点、致病力、传播力,还没有依据进行分析判断。
    现在实验室的检测大多是用的RT-PCR(反转录-聚合酶链式反应),先说PCR(聚合酶链式反应),大家都知道DNA是由ATCG四种碱基配对形成的双链,PCR方法就是找到这个病毒所特有的DNA片段后加入酶(就是高效催化剂)和碱基(相当于原料)生产DNA片段到能进行检测的程度。至于RT(反转录)就是把RNA转化成DNA
1生物安全柜(或超净工作台),提取RNA全程都在这里面操作
          

2口罩,防止操作人呼出的气体对提取的RNA造成污染
   

3冷冻高速离心机,使用时能保证高速离心的RNA溶液不会过热
 
4.YS-RNA提取试剂盒(离心柱法),提取H7N9禽流感病毒RNA
 

5.把送检的样品加有机溶剂使细胞破裂释放出RNA,在经过这个离心柱过滤,RNA就留在提取柱的膜上了。

 

6.提取完成,管子底部那一点点的溶液就是

7. 使用禽流感H7N9 RT-PCR凝胶检测试剂盒检测取H7N9禽流感病毒,试剂盒平时用专门的超低温冰箱在-20℃以下保存。

8.PCR扩增仪,这台仪器能把刚才提取到的RNA扩大几百万倍

9. 染色液和电泳仪。PCR扩增产物是有极性的,加到电泳仪里面通电后会在琼脂凝胶中移动。有的染色液有致癌性,建议做实验时做好防护工作。

10.凝胶成像系统,由于琼脂凝胶中加了染色液能让RNA染色然后被这机子的紫外灯检测出来,然后输入到电脑中就得到结果。

11.结果图从左到右分别是Maker、阳性对照、未知样品、阴性对照。在500bp处有条带为H7阳性样品,在300bp处有条带为N9阳性样品,否则为阴性样品。

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