制品内容(50次量) 本试剂盒包括溶液部分和离心管部分 溶液部分: 双联剂液 50mL 洗液 15mL 洗脱液 5mL RNA 酶 (20mg/mL) 50uL 离心管部分: 柱子 50支 离心收集管 50支 制品说明 1.使用本试剂盒中的双联剂可以代替通常方法提取质粒时需要的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等溶液,使需要三步完成的反应一步完成,简化实验步骤,节省时间。 2.使用本试剂盒提取的质粒,纯度高,没有核蛋白酶污染。 保存条件 溶液部分:RNA酶: -20℃保存。 其他试剂: 室温保存。 离心管部分: 室温保存。 操作方法 ⒈培养从平板培养基上挑选单菌落接种至含有抗生素的液体培养基中,37℃过夜培养。注意: 培养液不宜过量,培养液过量时,会因菌量太大而溶菌不充分,纯化时会影响质粒的纯度。 ⒉取1.5mL的过夜培养菌液,4℃12,000rpm离心,2分钟,弃上清。 ⒊用750uL的双联剂充分悬浮细菌沉淀,破碎菌体,释放质粒,一步完成。 注意: 不要残留细小菌块,要剧烈震荡5-10分钟,以使基因组DNA彻底断裂除去。 ⒋室温静置5分钟。 ⒌室温下12,000rpm,离心15分钟,取上清。注意:此时4℃离心不利于沉淀沉降。 ⒍将试剂盒中的柱子安置于离心收集管上。 ⒎将上述操作步骤5的上清液转移至柱子中,4℃12,000rpm 离心1分钟(如柱子中仍有液体残余,可适当提高离心速度,再离心1 分钟),弃滤液。 ⒏在膜中间加入1～2uLRNA酶。 ⒐加入750uL洗液,静置5分钟。12,000rpm离心1分钟,弃滤液。(洗液使用前按1:3比例加入无水乙醇,混匀)。 ⒑重复操作步骤9。 ⒒将残留在壁上的洗液吸干,室温干燥或真空离心5分钟。 ⒓将柱子安置于新的1.5mL离心管上,在柱子的膜中央处加入50uL 的洗脱液(无核苷酸污染)静置2分钟,12,000rpm离心1分钟洗脱DNA。 ⒔将滤液倒回,静置2分钟12,000rpm离心2分钟洗脱DNA。 ⒕收集滤液。 ⒖电泳检测。