TMB,即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine,是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下,TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm 或 620-650nm 测定吸光度。加入硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在450nm测定吸光度。本试剂盒常用于 ELISA检测,也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。用于 ELISA检测时,每个样品通常使用 0.2毫升显色液。
本显色剂采用**的显色技术,把所有的相关试剂全部配制在单一溶液中,仅由单一溶液组成,简化了操作步骤,使检测更加稳定可靠。
使用说明:
1.根据参考ELISA试剂盒的实验步骤,在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟。
2. 经HRP标记物孵育并充分洗涤后,酶标板每孔加入 200ul TMB 显色液。
3. 室温避光孵育 3-30 分钟或更长时间(可长达 24 小时),直至显色至预期深浅。
4. 加入50 微升2M H2SO4 终止反应,随后在 450nm测定吸光度。
常见问题:
1. 背景显色太深。
如果背景(没有样品的对照孔)显色太深,一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭,另一方面可以考虑缩短显色时间,或降低二抗浓度。另外,选择适当强度的洗涤液,或延长洗涤时间也会有所帮助。
2. 没有显色或显色太弱。
a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果,滴一滴稀释二抗在离心管内,检测二抗是否可以被正常显色。
b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系,例如使用生物素检测体系。
c. 可以适当延长显色时间。
注意事项:
1)TMB 对人体有刺激性,请注意适当防护。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
*Important Note: Thisproduct assupplied is intended for research use only, not for usein human,therapeutic ordiagnosticapplications.
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